取含巴比妥的血浆样品5mL，酸化后，精密加入25mL氯仿萃取，过滤，取滤液4.0mL，用0.45mol/LNaOH4.0mL振摇提取，取此碱性水层于260nm处测得吸收度A1为0.606，另取滤液4.0mL，加1mol/L硼酸-KCl缓冲液（pH约为10）4.0mL振摇提取，取水层于260nm处测得A2为0.229。同时取25.0μg/mL巴比妥氯仿溶液4.0mL，照上法提取、测定，测得A1′=0.608，A2′=0.202。