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临床医学检验(副高)

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内标荧光定量PCR方法将已知浓度的标准品与样品在同一管中进行扩增,已在临床上广泛应用。

根据所用内标品的不同,内标荧光定量PCR法分为

  • A、巢式PCR
  • B、非竞争内标定量PCR
  • C、竞争定量PCR
  • D、反转录PCR
  • E、原位PCR
  • F、数字PCR

内标法的优点包括

  • A、排除了PCR管间扩增效率不同所致的差异
  • B、重复性不好
  • C、定量准确
  • D、可用于监测试剂失效或Taq DNA聚合酶活性降低所致的假阴性
  • E、可用于监测仪器故障如扩增仪孔间温度差异所致的假阴性
  • F、可用于监测标本中抑制物或干扰物所致的假阴性

常用的构建竞争性内标的方法有

  • A、靶基因扩增产物的突变,保留引物部位序列不变
  • B、定点突变靶基因扩增产物的引物部位序列
  • C、基因敲除靶基因扩增产物的引物部位序列
  • D、将靶序列克隆人质粒载体,对其进行插入或缺失修饰
  • E、用引物扩增含靶基因引物结合位点的非同源性DNA序列
  • F、用引物扩增不含靶基因引物结合位点的同源性DNA序列
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