内标荧光定量PCR方法将已知浓度的标准品与样品在同一管中进行扩增,已在临床上广泛应用。
根据所用内标品的不同,内标荧光定量PCR法分为
- A、巢式PCR
- B、非竞争内标定量PCR
- C、竞争定量PCR
- D、反转录PCR
- E、原位PCR
- F、数字PCR
内标法的优点包括
- A、排除了PCR管间扩增效率不同所致的差异
- B、重复性不好
- C、定量准确
- D、可用于监测试剂失效或Taq DNA聚合酶活性降低所致的假阴性
- E、可用于监测仪器故障如扩增仪孔间温度差异所致的假阴性
- F、可用于监测标本中抑制物或干扰物所致的假阴性
常用的构建竞争性内标的方法有
- A、靶基因扩增产物的突变,保留引物部位序列不变
- B、定点突变靶基因扩增产物的引物部位序列
- C、基因敲除靶基因扩增产物的引物部位序列
- D、将靶序列克隆人质粒载体,对其进行插入或缺失修饰
- E、用引物扩增含靶基因引物结合位点的非同源性DNA序列
- F、用引物扩增不含靶基因引物结合位点的同源性DNA序列

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