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医学临床三基(儿科)

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核酸分子杂交有哪几种常用基本方法?

正确答案:(1)Southern印迹杂交:是指DNA与DNA的杂交,将电泳分离的待测DNA片段转移并结合到一定的固相支持物上,然后用标记的DNA探针检测待测DNA的一种方法。1975年英国爱丁堡大学的Southern建立了该方法,Southern印迹杂交由此得知。 (2)Northern印迹杂交:是指将待测RNA样品经电泳分离后转移到固相支持物上,然后与标记的核酸探针进行固-液相杂交,检测RNA(主要是mRNA)的方法,其基本原理和过程与Southern印迹杂交基本相同。 (3)斑点及狭缝印迹杂交:将RNA或DNA变性后直接点样于硝酸纤维素膜或尼龙膜上,用于基因组中特定基因及其表达的定性及定量研究,称为斑点印迹。 斑点印迹为圆形,而狭缝印迹为线状。 (4)原位杂交:核酸保持在细胞或组织切片中,经适当方法处理细胞或组织后,将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交,称为原位杂交。 根据检测对象的不同可将原位杂交分为细胞内原位杂交和组织切片原位杂交。原位杂交既可以检测DNA,也可以检测RNA,所用探针可以是DNA或RNA。这种方法具有高度灵敏的特点,而且能对所检测核酸进行细胞内或组织内定位。 (5)液相杂交:是指待测核酸分子与核酸探针都存在于杂交液中,碱基互补的单链核酸分子在液体中配对形成杂交分子。目前常用的液相杂交有RNA酶保护分析法、核酸酶S1保护分析法。
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