简述PCR及其临床应用。
正确答案:聚合酶链反应(PCR):利用DNA聚合酶(如Tag DNA聚合酶)等在体外条件下,催化一对引物间的特异DNA片段合成的基因体外扩增技术。
引物:单链DNA片段。
过程:变性DNA双链-单链(93~98℃),退火引物与模板结合(37~65℃),延伸双链合成(70~75℃)。
常见PCR技术的类型:原位PCR、逆转录PCR(RT-PCR)及定量RT-PCR、反向PCR、PCR-SSCP、PCR-ELISA.固相锚定PCR、mRNA差异显示逆转录PCR。
PCR的应用:(1)在感染性疾病中的应用:对传染性疾病进行病原学确证诊断;对病原体进行基因分型和同源性比较;克隆病原体各种蛋白质的基因,用于蛋白表达,制备诊断试剂或疫苗;发现新病原体;克隆病原体各种基因,建立基因表达载体,用于基因治疗。
(2)遗传性疾病的基因诊断:发现的遗传病有4000多种;产前诊断PCR-RFLP;PCR-ASO。
(3)肿瘤的研究及诊断:癌基因与抑癌基因。
(4)在法医学中的应用:个人认识;亲子鉴定。
(5)其他应用:DNA克隆;引入点突变、缺失或插入;重组PCR;DNA测序;示差PCR。
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