需要优化的PCR反应条件包括

• A、模板量和纯度
• B、引物浓度
• C、DNA聚合酶浓度
• D、dUTP浓度
• E、Mg²⁺浓度
• F、扩增条件，包括变性、复性、延伸的温度和时间等

退火温度是决定PCR反应特异性的关键因素，通常退火温度为

• A、T_m
• B、T_m减3℃
• C、T_m减5℃
• D、T_m减10℃
• E、T_m加3℃
• F、T_m加5℃

在一定范围内降低退火温度有以下哪些作用

• A、减少引物与靶DNA的错配，提高反应的特异性
• B、减少反应的产物量
• C、有利于引物和模板的复性
• D、容易导致引物与靶DNA的错配，增加非特异性反应
• E、提高PCR反应的重复性
• F、降低PCR反应的灵敏度